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1.首先將內層滅菌桶取出,再向外層鍋內加入適量的水,使水面與三角擱架相平為宜。
2.放回滅菌桶,并裝入待滅菌物品。注意不要裝得太擠,以免妨礙蒸汽流通而影響滅菌效果。三角燒瓶與試管口端均不要與桶壁接觸,以免冷凝水淋濕包口的紙而透入棉塞。
3.加蓋,并將蓋上的排氣軟管插入內層滅菌桶的排氣槽內。再以兩兩對稱的方式同時旋緊相對的兩個螺栓,使螺栓松緊一致,勿使漏氣。
4.用電爐或煤氣加熱,并同時打開排氣閥,使水沸騰以排除鍋內的冷空氣。待冷空氣*排盡后,關上排氣閥,讓鍋內的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升。當鍋內壓力升到所需壓力時,控制熱源,維持壓力至所需時間。本實驗用 1.05kg/cm2,121.3℃,20分鐘滅菌。
5.滅菌所需時間到后,切斷電源或關閉煤氣,讓滅菌鍋內溫度自然下降,當壓力表的壓力降至0時,打開排氣閥,旋松螺栓,打開蓋子,取出滅菌物品。如果壓力未降到0時,打開排氣閥,就會因鍋內壓力突然下降,使容器內的培養基由于內外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口,造成棉塞沾染培養基而發生污染。
6.將取出的滅菌培養基放入 37℃溫箱培養24小時,經檢查若無雜菌生長,即可待用。